文章轉(zhuǎn)載自：中國(guó)醫(yī)學(xué)文摘·皮膚科學(xué)2017年2月第34卷第1期
作者：樊建勇，趙陽(yáng)，楊慧蘭
皰疹病毒家族是一類具有包膜結(jié)構(gòu)的雙鏈DNA病毒，病毒基因組DNA長(zhǎng)度約120~240 kb，按生物學(xué)特征和基因組結(jié)構(gòu)不同可將皰疹病毒家族分為α，β和γ三個(gè)亞科。單純皰疹病毒(herpes simplex virus，HSV)屬α亞科，廣泛存在于自然界中，能感染人和許多動(dòng)物，尤其對(duì)人體皮膚組織具有較強(qiáng)的嗜性。皰疹病毒主要通過(guò)皮膚、黏膜和神經(jīng)組織感染宿主而引起相應(yīng)的病變，是人類病毒性疾病的常見(jiàn)病原體。單純皰疹病毒可分為HSV-1及HSV-2兩種血清型，HSV-1感染人體后主要引起口唇皰疹、咽炎、角膜炎，也能引起散發(fā)性腦炎等嚴(yán)重疾病的發(fā)生; HSV-2主要通過(guò)破損皮膚及黏膜感染引起生殖器皰疹(genitalherpes，GH )。近年來(lái)的流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，在引起生殖器皰疹病毒的病原中，HSV-1與HSV-2占有同樣重要的地位，均可在體內(nèi)長(zhǎng)期潛伏。在潛伏感染過(guò)程中，皰疹病毒基因組的結(jié)構(gòu)和功能均未受到任何影響和破壞，而病毒基因轉(zhuǎn)錄及表達(dá)相關(guān)的一系列調(diào)控都處于停滯狀態(tài)。此過(guò)程沒(méi)有完整的基因組復(fù)制，但存在有限的局部基因轉(zhuǎn)錄，并在特定條件下進(jìn)入增殖性復(fù)制感染階段。單純皰疹病毒的增殖性復(fù)制，是病毒自身調(diào)控蛋白與細(xì)胞內(nèi)特定分子之間相互作用引起的一系列轉(zhuǎn)錄事件，但對(duì)潛伏狀態(tài)下病毒基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控事件及其進(jìn)入復(fù)制性增殖的過(guò)程卻知之甚少。目前生殖器皰疹發(fā)病率迅速增加且易復(fù)發(fā)，這給相關(guān)疾病的治療及預(yù)防造成了巨大困難。闡明病毒潛伏感染及復(fù)發(fā)的相關(guān)機(jī)制，對(duì)進(jìn)一步揭示HSV感染復(fù)發(fā)發(fā)生的本質(zhì)，確立治療靶點(diǎn)，以有效防治HSV感染及潛伏復(fù)發(fā)有重要的意義。本文綜述了單純皰疹病毒的生物學(xué)特點(diǎn)、可能的潛伏復(fù)發(fā)機(jī)制、HSV感染的臨床防治策略及近年來(lái)HSV疫苗研制的最新進(jìn)展。
一、單純皰疹病毒的生物學(xué)特點(diǎn)
HSV-1由被膜、衣殼、核心及囊膜組成球形病毒。病毒核心是雙鏈線性DNA，纖絲卷軸纏繞，約125~240kb。HSV-2的基因組約154kb。HSV-2 HG52株基因組的G+C含量約70%，其中間由L-S交界處共價(jià)連接的18%短片段(S)和82%的長(zhǎng)片段(L)所組成。每個(gè)片段包括兩端的反向重復(fù)序列(TRL，IRL，IRS和TRS)和中間的獨(dú)特序列(ML和US)。由于他們的連接方式不一樣，HSV-2基因組出現(xiàn)4種同分異構(gòu)體分子。HSV轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制多樣，基因組結(jié)構(gòu)復(fù)雜，基因數(shù)目較多并相互重疊。
HSV-2基因通過(guò)嚴(yán)格的級(jí)聯(lián)調(diào)控被轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，根據(jù)時(shí)間先后順序分為立即早期基因(immedi-ate-early gene IE orα)、早期基因(early gene，E orβ)、晚期基因(late gene，L orγ)三類。立即早期基因是感染后最先表達(dá)，可被病毒晚期蛋白VP16反式激活，病毒潛伏感染的激活及復(fù)制性增殖與立即早期蛋白或感染多膚(infected cell polypeptide ICP)密切相關(guān)，主要包括ICP47，ICP4，ICP27，ICP22和ICPO。ICPO和ICP4在病毒的復(fù)制中發(fā)揮最重要的作用。早期基因的復(fù)制通過(guò)誘導(dǎo)立即早期基因編碼的蛋白反式作用，同時(shí)以級(jí)聯(lián)調(diào)控的方式對(duì)早期基因和晚期基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)進(jìn)行調(diào)節(jié)。早期基因有β1，β2，β1由ICP6和ICP8組成，β2是病毒核酸代謝的主要病毒蛋白，包含胸苷激酶和DNA多聚酶等。晚期基因的產(chǎn)物主要是病毒的結(jié)構(gòu)蛋白，包括一些糖蛋白、衣殼蛋白和內(nèi)膜蛋白等，其與病毒的吸附、進(jìn)入和融合以及病毒的抗原性有關(guān)。
二、單純皰疹病毒的潛伏感染機(jī)制
HSV極具傳染力，可引起多種廣泛流行的疾病，且易建立潛伏感染。HSV-1和HSV-2分別能在三叉神經(jīng)節(jié)和骸尾神經(jīng)節(jié)內(nèi)終生潛伏。Kesan等曾給HSV-1的潛伏作過(guò)這樣的定義:
①病毒能在宿主體內(nèi)持續(xù)存在但宿主本身不表現(xiàn)任何相關(guān)的臨床癥狀;
②潛伏感染的HSV病毒可由潛伏狀態(tài)被再次激活并伴隨具感染力的病毒顆粒產(chǎn)生;
③病毒處于潛伏感染狀態(tài)時(shí)，不表達(dá)任何相關(guān)的增殖性基因，但在宿主細(xì)胞核內(nèi)會(huì)大量積累潛伏相關(guān)轉(zhuǎn)錄體(La-tency-Associated transcripts，LATs);
④病毒不表達(dá)相關(guān)抗原，但宿主體內(nèi)可檢測(cè)到病毒基因組的存在。
這個(gè)定義分別從四個(gè)不同的層面界定了HSV-1潛伏感染時(shí)的表型，并且與HSV-2潛伏感染的情況吻合。雖然隨著檢測(cè)技術(shù)的逐步發(fā)展，ICPO和TK激酶等病毒增殖性感染基因在病毒潛伏感染期間也有微量表達(dá)，但研究者認(rèn)為這是由于潛伏感染與再激活感染之間的動(dòng)態(tài)平衡所引起的。
HSV-2病毒在體內(nèi)引起潛伏感染的原因主要有以下幾個(gè)方面:
①病毒感染后免疫逃逸;
② LAT基因?qū)Σ《玖⒓丛缙诘鞍妆磉_(dá)的抑制及其調(diào)控;
③病毒基因組與宿主細(xì)胞的相互作用，包括病毒基因?qū)?xì)胞蛋白、RNA合成的抑制、HSV感染病毒mRNA的選擇性翻譯、皰疹病毒對(duì)細(xì)胞周期系統(tǒng)及細(xì)胞凋亡的調(diào)控作用等;
④病毒基因組編碼的micro RNA介導(dǎo)的調(diào)控作用;
⑤ CTCF通過(guò)HSV基因組上CTCF特異結(jié)合的序列，調(diào)控其潛伏復(fù)發(fā)。
2. 1 HSV逃避免疫監(jiān)控的機(jī)制
不同種屬的DNA和RNA病毒均可能躲避免疫系統(tǒng)的監(jiān)視，在宿主體內(nèi)長(zhǎng)期寄生。病毒成功的免疫逃逸是造成慢性皰疹病毒感染的主要原因之一。其機(jī)制主要包括以下六個(gè)方面。
2.1.1病毒基因的限制性表達(dá)
幾乎所有病毒都不同程度地利用這一方式來(lái)躲避宿主免疫系統(tǒng)的監(jiān)視，皰疹病毒和一些反轉(zhuǎn)錄病毒表現(xiàn)得尤為突出。一旦單純皰疹病毒在神經(jīng)元內(nèi)潛伏下來(lái)，病毒基因組織所有基因除了一種以外全部停止轉(zhuǎn)錄，使得被感染神經(jīng)元內(nèi)幾乎沒(méi)有任何病毒的痕跡。大量研究表明LAT具有抑制病毒基因表達(dá)的功能。
2.1.2利用宿主體內(nèi)的免疫豁免部分
人體少數(shù)組織和器官是免疫細(xì)胞不得介入的部位，享有免疫豁免的“特權(quán)”，因此進(jìn)入免疫豁免部位的病毒在不引起局部炎癥反應(yīng)的情況下可以暫時(shí)避開(kāi)免疫系統(tǒng)的監(jiān)視。中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的血-腦脊液屏障限制了淋巴細(xì)胞進(jìn)入CNS，因而不易被T淋巴細(xì)胞所識(shí)別。因此，CNS是包括HSV在內(nèi)的數(shù)種病毒長(zhǎng)期慢性感染和潛伏的器官。
2.1.3病毒抗原的變異
HSV病毒也可通過(guò)基因突變來(lái)逃避宿主的免疫監(jiān)視。病毒基因突變后其編碼的抗原亦隨之發(fā)生了變異。表面抗原的變異可能使病毒突變株暫時(shí)避免已有抗體的中和或調(diào)理作用，獲得一定的生存優(yōu)勢(shì)。CTL和Th細(xì)胞對(duì)徹底清除和控制病毒的慢性感染起十分重要的作用，它們能夠識(shí)別被MHC分子遞呈的病毒蛋白質(zhì)分子中的T淋巴細(xì)胞表位。如果病毒在體內(nèi)繁殖過(guò)程中的基因突變恰好改變了原來(lái)的T淋巴細(xì)胞表位，使得這個(gè)新的肽段或者不再能與宿主的MHC分子結(jié)合，或者結(jié)合了也不能被T淋巴細(xì)胞所識(shí)別，病毒突變株便能暫避開(kāi)CTL及Th細(xì)胞作用，獲得親代株所沒(méi)有的繁殖優(yōu)勢(shì)。這種現(xiàn)象在HSV、乙型肝炎病毒和EB病毒中均已得到證實(shí)。
2. 1.4干擾宿主細(xì)胞的抗原遞呈
抗原呈遞細(xì)胞表面CD1d分子呈遞的脂類抗原能誘導(dǎo)NK細(xì)胞的免疫應(yīng)答，這對(duì)于宿主抵抗病毒抗原的攻擊非常重要。Liu等研究發(fā)現(xiàn)HSV-1感染可以抑制抗原呈遞細(xì)胞表面CD1d分子的表達(dá)。這不是因?yàn)镠SV抑制了CD1d的合成，而是因?yàn)樗匦路峙浒痰腃D1d分子到溶酶體界膜上，進(jìn)而阻止胞吞的CD1d分子重新出現(xiàn)在細(xì)胞表面。也可能是因?yàn)镠SV抑制新合成的CD1 d分子轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞表面。也有研究表明HSV編碼的ICP47可以結(jié)合到抗原呈遞相關(guān)運(yùn)載體TAP-1 /2上，阻止病毒蛋白運(yùn)輸?shù)絻?nèi)質(zhì)網(wǎng)，裝載到新生的MHC-I分子上，最終呈遞給CD8﹢T細(xì)胞。
2. 1. 5抑制TCR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)
T淋巴細(xì)胞是抗HSV感染免疫應(yīng)答的重要組成成分。Yang等研究發(fā)現(xiàn)HSV通過(guò)抑制TCR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)而使T細(xì)胞失活。對(duì)TCR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的抑制既發(fā)生于TCR信號(hào)級(jí)聯(lián)過(guò)程的T細(xì)胞激活聯(lián)結(jié)子處，也發(fā)生于遠(yuǎn)離T細(xì)胞激活聯(lián)結(jié)子的步驟處，包括對(duì)于鈣流量和多重MAPK(促分裂原活化蛋白激酶)的抑制。HSV誘導(dǎo)的T細(xì)胞失活導(dǎo)致酪氨酸殘基處T細(xì)胞激活聯(lián)結(jié)子磷酸化水平降低，而酪氨酸殘基的磷酸化對(duì)于TCR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)卻具有重要意義。
2.1.6干擾免疫效應(yīng)子的功能
干擾素位于宿主抵抗病毒感染的第一線，大量研究表明干擾素是一個(gè)可溶性蛋白質(zhì)家族，它們介導(dǎo)宿主的抗病毒效應(yīng)，調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)和免疫應(yīng)答的激活。干擾素固有的抗病毒活性非常有效和快速。所以許多病毒通過(guò)抑制干擾素的合成或下游的抗病毒效應(yīng)來(lái)逃避宿主的免疫監(jiān)視。Davis等研究發(fā)現(xiàn)，HSV編碼的ICP34. 5對(duì)病毒逃避宿主的固有免疫應(yīng)答具有重要的作用。ICP34. 5使eIF2α(在抗病毒應(yīng)答中被PKR磷酸化的翻譯起始因子)脫磷酸化，進(jìn)而降低了干擾素-β等細(xì)胞因子的表達(dá)。Mogensen研究發(fā)現(xiàn)HSV-1促進(jìn)病毒基因表達(dá)的間層蛋白VP16，通過(guò)降低IL-6 mRNA的穩(wěn)定性來(lái)抑制促炎細(xì)胞因子的表達(dá)。這種抑制并不是由VP16直接介導(dǎo)，而是依賴于病毒立即早期基因編碼的ICP4(感染細(xì)胞蛋白)和ICP27。在HSV感染的初期，它們以一個(gè)VP16依賴的方式被表達(dá)。HSV包膜糖蛋白gC能夠結(jié)合到補(bǔ)體C3b上，使病毒不被補(bǔ)體成分所中和。實(shí)驗(yàn)表明，野生HSV病毒株在補(bǔ)體存在時(shí)也維持完全的侵襲力，然而不表達(dá)gC的突變株即使在缺乏抗體的情況下也能被補(bǔ)體所中和。
2. 2 LAT基因在HSV潛伏復(fù)發(fā)中的作用
LATs家族包括主要LATs(由2.Okb，l.5kb，1.45kb組成)和非主要LAT(由8.3kb組成)。這些RNA部分呈線形，部分呈環(huán)形，但都是通過(guò)不同的折疊方式而被激活。非主要LAT是一個(gè)8.3 kb的轉(zhuǎn)錄子，經(jīng)剪接得到一個(gè)2.0kb的LAT，再剪去約500bp，可生成1.5kb或1.45 kb的LAT。LAT被認(rèn)為在高效建立潛伏過(guò)程中起重要作用。另外還發(fā)現(xiàn)，LAT啟動(dòng)子部分序列小片段的缺失，即可導(dǎo)致潛伏感染細(xì)胞數(shù)目的驟減，因而揭示了LATs的轉(zhuǎn)錄是建立潛伏感染的關(guān)鍵。LAT具有多功能性，在HSV潛伏的建立、維持激活過(guò)程中起作用。目前主要采用缺失突變的策略來(lái)研究LAT在潛伏感染中的作用。
2. 2. 1 LAT在建立潛伏感染中的作用
LAT被認(rèn)為在高效建立潛伏過(guò)程中發(fā)揮重要作用，LAT啟動(dòng)子部分序列小片段的缺失，即可導(dǎo)致潛伏感染細(xì)胞數(shù)目的驟減，提示了LAT的轉(zhuǎn)錄是建立潛伏感染的關(guān)鍵。
2. 2. 2 LAT在維持潛伏感染中的作用
HSV病毒潛伏的維持機(jī)制至今仍不明確。有兩個(gè)反義轉(zhuǎn)錄抑制機(jī)制的假說(shuō)，一種假說(shuō)認(rèn)為在潛伏過(guò)程中2.0kb LAT通過(guò)反義RNA機(jī)制抑制ICPO蛋白的表達(dá)，阻斷病毒的復(fù)制;另一種假說(shuō)認(rèn)為，是非主要LAT在潛伏過(guò)程中通過(guò)反義RNA機(jī)制來(lái)抑制ICP4蛋白的表達(dá)，以此來(lái)阻止病毒的復(fù)制，推遲病毒進(jìn)入裂解期。研究發(fā)現(xiàn)，在潛伏過(guò)程中還存在幾組裂解性病毒基因轉(zhuǎn)錄的mRNA，由于轉(zhuǎn)錄的水平很低，因此不易檢測(cè)到。Chen等在LAT突變病毒株潛伏過(guò)程中，檢測(cè)到了立即早期蛋白ICP4基因和早期蛋白TK基因的轉(zhuǎn)錄體表達(dá)水平比野生病毒要高數(shù)倍。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，ICP4通過(guò)與miR-101的前體hsa-mir-101-2結(jié)合下調(diào)RNA結(jié)合蛋白富G序列因子1（GRSFl)的表達(dá)，抑制HSV-1病毒的復(fù)制。
2. 2. 3 LAT在病毒復(fù)發(fā)中的作用
復(fù)發(fā)過(guò)程中早期LAT基因的表達(dá)，可能在促使裂解性基因從沉默到表達(dá)發(fā)揮了重要作用。在潛伏過(guò)程中，ICP4的mRNA在神經(jīng)節(jié)里始終有表達(dá)，盡管是很低的表達(dá)量。因此，當(dāng)ICPO mRNA出現(xiàn)及其表達(dá)量上調(diào)時(shí)，可作為病毒進(jìn)入裂解復(fù)制期的標(biāo)志。實(shí)驗(yàn)表明，在LAT基因的小鼠中，HSV-1病毒的DNA量是LAT基因缺陷小鼠的3倍，其激活和表達(dá)與CD8，PD-1及Tim-3有關(guān)。
2 . 2. 4 LAT通過(guò)編碼microRNA執(zhí)行抗細(xì)胞凋亡功能
MicroRNA(miRNA)是一類新發(fā)現(xiàn)的調(diào)節(jié)基因表達(dá)的小分子單鏈非編碼RNA，是動(dòng)植物和病毒體內(nèi)調(diào)節(jié)RNA穩(wěn)定性和翻譯效率的重要因素。無(wú)論是HSV-1還是HSV-2 LATS，均編碼多個(gè)功能miRNA，而且它們?cè)跐摲诘谋磉_(dá)量比在急性感染期間的表達(dá)量要高很多。針對(duì)HSV-1，CUI等通過(guò)計(jì)算機(jī)模擬及與miRNAs序列比對(duì)，找到24對(duì)候選miRNA和13對(duì)miRNA前體，2010年，Igor Jura等通過(guò)高通量測(cè)序證實(shí)17種由HSV-2表達(dá)的miRNA，到目前為止，miRNA庫(kù)MiRBase已經(jīng)記載有18種。本課題組的近期研究證實(shí)了HSV-2 LATs編碼的miR-H4-5p可靶向作用于感染的宿主細(xì)胞CDKN2A和CDKL2基因，引起其mRNA和蛋白質(zhì)水平的降低，并發(fā)揮抗ActD誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡作用，也可促使細(xì)胞周期進(jìn)入S期，促進(jìn)細(xì)胞增殖。而miR-H3可發(fā)揮抗ActD誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡作用，但對(duì)細(xì)胞周期無(wú)明顯作用，其具體的分子機(jī)制仍不十分清楚。這表明HSV-2 miRNA調(diào)控病毒自身和宿主基因的表達(dá)，發(fā)揮RNA干擾效應(yīng)，進(jìn)而抑制神經(jīng)元細(xì)胞凋亡，有利于維持病毒持續(xù)潛伏感染。通過(guò)上調(diào)或者下調(diào)miRNA的表達(dá)，可改變目的基因表達(dá)，以達(dá)到治療或者干預(yù)的目的。miRNA作為一類新型的藥物作用靶點(diǎn)逐漸受到各界關(guān)注，HSV-2治療新思路將從miRNA出發(fā)，去針對(duì)性的阻止或破壞HSV-2。雖說(shuō)現(xiàn)在這些都還停留在實(shí)驗(yàn)階段，但有理由相信小分子miRNA藥物也有望成為一個(gè)治療HSV潛伏感染的新方法。
2. 3 CTCF在HSV潛伏復(fù)發(fā)中的作用
CTCF含有727個(gè)氨基酸殘基，中段(M段)312個(gè)殘基形成11個(gè)連續(xù)的鋅指結(jié)構(gòu)，氨基端(N段)和梭基端(C段)分別有265和150個(gè)殘基，是廣泛表達(dá)并在進(jìn)化上高度保守的11鋅指DNA結(jié)合蛋白，它通過(guò)鋅指與約50bp長(zhǎng)的DNA靶位點(diǎn)結(jié)合形成不同的CTCF-DNA復(fù)合體，可以通過(guò)不同基因上的靶位調(diào)控多種功能，包括轉(zhuǎn)錄抑制和活化激素調(diào)節(jié)的基因沉默、甲基化依賴的染色質(zhì)絕緣以及真核生物組蛋白乙酰化、親本印跡以及染色體的異染色質(zhì)化等起著重要的作用，并且通過(guò)自身形成多聚體或與其他蛋白質(zhì)相互作用、與亞細(xì)胞核結(jié)構(gòu)共定位等多種方式，參與形成并維持特異的染色質(zhì)結(jié)構(gòu)而在表觀遺傳的調(diào)控中發(fā)揮關(guān)鍵作用。CTCF是與細(xì)胞生長(zhǎng)增殖及系統(tǒng)發(fā)生相關(guān)的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的中心環(huán)節(jié)，CTCF的mRNA下降幅度、蛋白下降幅度與細(xì)胞生長(zhǎng)抑制程度之間具有明顯的相關(guān)性，提示CTCF蛋白正常表達(dá)對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的重要性。很多絕緣子序列上有許多CTCF結(jié)合位點(diǎn)，該序列上DNA的甲基化可以阻止CTCF的結(jié)合，抑制CTCF的功能。CTCF也是唯一已用實(shí)驗(yàn)證明介導(dǎo)不同絕緣子增強(qiáng)子阻斷功能的轉(zhuǎn)錄因子。CTCF是組織染色質(zhì)高級(jí)結(jié)構(gòu)的核心蛋白，它的功能從果蠅到人類，包括一些人類的病原體，如EBV，KSHV和HSV等都是很保守的，可以引起表觀遺傳改變，利用模式病毒來(lái)研究染色質(zhì)高級(jí)結(jié)構(gòu)對(duì)外界入侵的規(guī)律。
有研究表明，在HSV-1基因組上有很多CTCF特異結(jié)合的序列，尤其是在LAT，ICPO及ICP4區(qū)域。在HSV-1潛伏感染期間，絕緣子上富集著CTCF蛋白，野生型潛伏的HSV-1在激活刺激下會(huì)伴隨CTCF從其結(jié)合序列上脫落。ICPO及ICP4上游的CTCF結(jié)合序列是典型的絕緣子，它們可以減弱LAT增強(qiáng)子的作用。總體來(lái)說(shuō)，在潛伏及激活過(guò)程中，CTCF與其結(jié)合序列的結(jié)合程度會(huì)根據(jù)不同階段而進(jìn)行調(diào)節(jié)，以此來(lái)影響HSV-1基因的表達(dá)。因此可知表觀遺傳調(diào)控在HSV-1潛伏和再激活的轉(zhuǎn)換過(guò)程中起著非常重要的作用。HSV-1 LAT 2.0kb內(nèi)含子上面有大量的CTCF結(jié)合位點(diǎn)，且CTCF可以通過(guò)與這些位點(diǎn)的結(jié)合及脫落來(lái)調(diào)節(jié)與病毒復(fù)制相關(guān)的基因表達(dá)，以此來(lái)影響病毒的潛伏與復(fù)發(fā)。本課題組的最新研究正在首次對(duì)CTCF在HSV-2上的結(jié)合做初步探索，研究發(fā)現(xiàn)HSV-2 LAT 3′端與內(nèi)含子內(nèi)存在CTCF結(jié)合位點(diǎn)，具有減弱基因啟動(dòng)子功能的效應(yīng)，可能在HSV-2的潛伏中發(fā)揮關(guān)鍵作用。為HSV-2潛伏復(fù)發(fā)機(jī)制及治療思路的研究找到了新的方向。
三、HSV感染的防治進(jìn)展
3. 1 HSV感染的臨床治療
目前針對(duì)HSV感染的治療目標(biāo)主要包括緩解癥狀、減少?gòu)?fù)發(fā)、減少排毒以及減輕患者心理負(fù)擔(dān)，治療手段主要包括系統(tǒng)抗病毒治療、局部治療、免疫治療及健康教育等。
參考2009年中國(guó)生殖器皰疹臨床診療指南的推薦，系統(tǒng)抗病毒是目前最主要的治療方法，常用的藥物有阿昔洛韋、伐昔洛韋與泛昔洛韋等，分為間歇療法和長(zhǎng)期抑制療法兩種。間歇療法即發(fā)作時(shí)用藥，推薦在患者出現(xiàn)前驅(qū)癥狀或皮損出現(xiàn)24h內(nèi)給予抗病毒藥物:口服阿昔洛韋200mg 5次//d，共5d;或阿昔洛韋400mg 3次//d，共5d;或伐昔洛韋5OOmg 2次/d，共5d;或伐昔洛韋300mg 2次/d，共7d;或泛昔洛韋250mg 3次//d，共5d。其中初發(fā)性單純皰疹的抗病毒治療，療程需延長(zhǎng)至lOd。對(duì)于頻繁發(fā)作的患者(每年發(fā)作大于6次)，可推薦長(zhǎng)期抑制療法:口服阿昔洛韋400mg 2次/d;或伐昔洛韋5OOmg 1次/d，療程一般為6個(gè)月或更長(zhǎng)時(shí)間。長(zhǎng)期抑制療法雖然可減少單純皰疹的復(fù)發(fā)次數(shù)，但目前尚無(wú)證據(jù)表明，此法可阻止停藥后復(fù)發(fā)。此外，針對(duì)單純皰疹的局部治療具有一定的輔助作用，包括皮損處選用生理鹽水、3%硼酸溶液等清洗或濕敷，無(wú)明顯滲出時(shí)外用3%阿昔洛韋乳膏、1%噴昔洛韋乳膏等。聯(lián)合應(yīng)用免疫治療也是臨床上治療單純皰疹的重要方法，常用的免疫調(diào)節(jié)劑有胸腺肽、干擾素、轉(zhuǎn)移因子、IL-2、左旋咪唑和咪喹莫特等。而對(duì)患者采取必要的健康宣教及心理干預(yù)，教育其保持規(guī)律的生活習(xí)慣，適當(dāng)?shù)捏w育鍛煉和良好的心理狀態(tài)，與藥物治療同樣重要。
3. 2 HSV感染的預(yù)防及疫苗研制進(jìn)展
3. 2. 1 HSV感染的預(yù)防
抗病毒治療或聯(lián)合應(yīng)用免疫治療，難以徹底清除體內(nèi)HSV而達(dá)到治愈效果，因此HSV感染的預(yù)防尤為重要。咨詢、性行為教育和疫苗接種是最重要的預(yù)防手段。單純皰疹的傳染源包括現(xiàn)癥患者、亞臨床或無(wú)癥狀排毒患者，因后兩者較為隱匿，故在臨床上更為重要。避免不安全性行為，全程使用安全套，及時(shí)治療性伴是最基本的預(yù)防手段。研制高效、安全的疫苗是預(yù)防和治療HSV感染的關(guān)鍵。
3. 2. 2 HSV疫苗研究
HSV疫苗研究已開(kāi)展多年，并取得了一定進(jìn)展，但目前針對(duì)HSV的疫苗研究仍停留在體外實(shí)驗(yàn)、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和上市前臨床試驗(yàn)階段，全球范圍內(nèi)尚無(wú)HSV疫苗經(jīng)批準(zhǔn)上市。根據(jù)成分及作用機(jī)制的不同，HSV-2疫苗可劃分為滅活疫苗、減毒活疫苗、復(fù)制缺陷性病毒疫苗、亞單位疫苗、肽疫苗、活載體疫苗和DNA疫苗等。早期研制的HSV滅活疫苗，由于其功效差、免疫原性低及潛在致癌性等缺陷，現(xiàn)已基本停止研究。
3.2.2. 1減毒活疫苗
減毒活疫苗是通過(guò)基因敲除等手段將相關(guān)HSV毒力、潛伏或復(fù)活等功能的基因刪除，得到有復(fù)制能力與免疫原性，但無(wú)致病性或致病力低的減毒疫苗株。2000年初，幾個(gè)HSV-2減毒活疫苗試驗(yàn)表明該疫苗阻止了37.5%的患者復(fù)發(fā)。近期關(guān)于HSV-2 ICPO-突變疫苗株的研制取得了進(jìn)展，其中HSV-20△NLS疫苗株經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)了其良好的安全性及免疫原性，報(bào)道稱115例小鼠接種HSV-20△NLS株后，有114例在HSV病毒攻擊中存活，而對(duì)照組45例小鼠接種gD亞單位疫苗，僅有3例在病毒攻擊中存活，展示了其優(yōu)于gD亞單位疫苗10一100倍的效能，表明這是一個(gè)強(qiáng)有力的HSV-2候選疫苗則。HSV-2減毒活疫苗的另一個(gè)具有吸引力的候選株是HSV-2-gD27，體外實(shí)驗(yàn)及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)其對(duì)神經(jīng)細(xì)胞系及小鼠感覺(jué)神經(jīng)節(jié)喪失感染力，接種后可產(chǎn)生免疫原性而喪失致病性網(wǎng)。應(yīng)用減毒活疫苗的缺陷主要為可能會(huì)產(chǎn)生HSV野生型。
3.2.2.2復(fù)制缺陷性病毒疫苗
復(fù)制缺陷性病毒疫苗是將部分病毒復(fù)制的必需基因刪除的一種特殊類型的活疫苗，同樣展示了其良好的安全性及免疫原性。2000年研制的非感染性單周期病毒(DISC)是一種特殊的復(fù)制缺陷性HSV突變體，通過(guò)刪除UL22基因區(qū)，使病毒不能編碼gH糖蛋白而無(wú)法感染正常細(xì)胞，其Ⅱ期臨床試驗(yàn)的結(jié)果卻不盡理想，雖然具有較好的安全性，但不能有效控制HSV-2的復(fù)發(fā)感染和改善病程，目前在研的復(fù)制缺陷性病毒疫苗主要候選株包括ACAM529，CJ2-gD2與gE2-del株等。
3.2.2.3亞單位疫苗
亞單位疫苗是HSV疫苗研究最多的類型，此類疫苗是將重組表達(dá)的HSV亞單位組分作為抗原，與適當(dāng)?shù)淖魟┡湮槎瞥伞Ｍǔ＿x用病毒的表面糖蛋白作為抗原，如gD和gB。gD2-鋁劑-MPL疫苗為GSK公司研發(fā)，經(jīng)兩項(xiàng)Ⅲ期臨床觀察表明，該疫苗只對(duì)HSV-1血清反應(yīng)陰性的女性有效，而對(duì)HSV-1血清反應(yīng)陽(yáng)性的女性和所有男性則無(wú)明顯保護(hù)作用。最新一項(xiàng)納入8 323名女性的大型隨機(jī)、雙盲臨床實(shí)驗(yàn)證實(shí)該疫苗可有效預(yù)防HSV-1感染，但無(wú)法阻止HSV-2感染所引起的生殖器皰疹及其他感染。這些研究的結(jié)果表明，一個(gè)簡(jiǎn)單的糖蛋白或幾個(gè)糖蛋白可能無(wú)法對(duì)HSV-2誘導(dǎo)免疫反應(yīng)。但是，一些新的潛在的亞單位疫苗，如:gD2△TMR340-363(ICP4383-766)，gD-Fc，gC2&gD2等正在研發(fā)中，為研制有效的HSV-2疫苗帶來(lái)新的希望。
3.2.2.4肽疫苗
肽疫苗內(nèi)所含的合成肽可誘導(dǎo)抗HSV的保護(hù)性免疫反應(yīng)，其可作用于體內(nèi)T細(xì)胞或B細(xì)胞抗原表位，最近的動(dòng)物及人體實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，肽疫苗具有良好的免疫原性，可誘發(fā)體內(nèi)HSV特異性CD4+和CD8+T細(xì)胞反應(yīng)，肽疫苗也是潛在的候選疫苗之一。
3.2.2.5活載體疫苗
活載體疫苗是表達(dá)HSV的某些亞單位成分的異源性載體(如腺病毒和牛痘病毒)，接種宿主可引發(fā)強(qiáng)烈的HSV特異性免疫反應(yīng)。研究表明，表達(dá)HSV-2 gD的牛痘病毒安卡拉(MVA)載體可誘導(dǎo)強(qiáng)烈的細(xì)胞和體液免疫。此外，表達(dá)衣原體MOMP和HSV-2 gD的重組霍亂弧菌載體(rVCG)可誘導(dǎo)體內(nèi)高水平的衣原體和HSV-2抗體的表達(dá)，并引發(fā)強(qiáng)烈的Thl免疫應(yīng)答。此類疫苗的主要缺點(diǎn)是由于異源性載體的存在，可能引發(fā)人體表達(dá)不同的抗體，影響疫苗的效果，也可能對(duì)人類健康構(gòu)成威肋。
3. 2. 2. 6 DNA疫苗
DNA疫苗起源于1990年，為HSV疫苗研制的一條新思路。由于gD2和gB2基因是誘導(dǎo)免疫反應(yīng)的主要抗原，被廣泛用于構(gòu)造HSV DNA疫苗，一項(xiàng)HSV-2 DNA疫苗臨床研究證實(shí)，其可誘導(dǎo)特定的細(xì)胞免疫應(yīng)答，卻無(wú)誘導(dǎo)機(jī)體體液免疫的作用。由此可見(jiàn)，DNA疫苗的免疫效果還待進(jìn)一步提高。
四、結(jié)語(yǔ)
隨著對(duì)單純皰疹病毒了解的不斷增加，人們將重新認(rèn)識(shí)HSV建立潛伏和逃避宿主的先天性免疫或適應(yīng)性免疫系統(tǒng)的機(jī)制。HSV治療的新思路將從miRNA出發(fā)，針對(duì)性地阻止或破壞HSV。雖說(shuō)現(xiàn)在這些都還停留在實(shí)驗(yàn)階段，但有理由相信通過(guò)研究者的努力，是可以開(kāi)發(fā)出徹底治愈HSV所引起疾病的藥物。而目前HSV疫苗的研制也仍存在許多問(wèn)題有待解決，其最終問(wèn)世可能還需要時(shí)間。對(duì)HSV的免疫學(xué)特點(diǎn)及感染機(jī)制進(jìn)行更深入的研究，將對(duì)疫苗的研制有重要的指導(dǎo)意義。
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