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文章轉(zhuǎn)載自：中國皮膚性病醫(yī)學(xué)雜志

作者：秦鷗，王學(xué)民，談益妹，江文才

［摘要］目的探討受到微弱損傷的皮膚致敏后，發(fā)生變應(yīng)性接觸性皮炎的幾率及對皮膚的影響。方法采用十二烷基磺酸鈉敷貼，膠帶粘貼及紫外線照射三種方式對皮膚進(jìn)行微弱損傷并用芳香混合物Ⅰ致敏，通過臨床評估，非創(chuàng)儀器TewameterTM210，Corneometer CM820，ChromameterCＲ400和實(shí)驗(yàn)室檢查評價(jià)皮膚表面狀況，檢測皮膚經(jīng)表皮失水率、含水量、顏色和炎癥及致敏情況。結(jié)果進(jìn)行微弱損傷后，臨床評估為0分，但十二烷基磺酸鈉和膠帶粘貼部位經(jīng)表皮失水率顯著高于微損傷前，十二烷基磺酸鈉部位含水量顯著低于微損傷前(P＜0.05)。致敏后，十二烷基磺酸鈉和膠帶粘貼部位的臨床評分、經(jīng)表皮失水率和a*值均比未受過微損傷的致敏部位顯著升高(P＜0.05);IL-1α和IL-12的含量較致敏前顯著升高(P＜0.05)。以上差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論及早發(fā)現(xiàn)皮膚屏障受到的微弱損傷，能及時(shí)阻斷無臨床癥狀的皮膚向臨床疾病方向發(fā)展，預(yù)防接觸性皮炎的產(chǎn)生和發(fā)展。

［關(guān)鍵詞］表皮屏障；微弱損傷；接觸致敏

皮膚是防止外來有害物質(zhì)進(jìn)入機(jī)體的第一道防線，其最主要的生理功能是皮膚屏障功能。屏障功能的有效發(fā)揮依賴于角質(zhì)層結(jié)構(gòu)的完整和功能的正常，其結(jié)構(gòu)主要由角質(zhì)細(xì)胞、細(xì)胞間脂質(zhì)和皮膚附屬器三部分組成。若角質(zhì)層結(jié)構(gòu)受損或功能發(fā)生異常改變，屏障功能將被破壞，對物質(zhì)滲透吸收增加，經(jīng)表皮失水率(transepidermalwaterloss，TEWL)升高。受損的皮膚屏障有利于變應(yīng)原滲透，透皮吸收增加又促進(jìn)表皮的炎癥改變，因此，若受損的皮膚接觸抗原，會(huì)導(dǎo)致變應(yīng)性接觸性皮炎(allergiccontactdermatitis，ACD)的發(fā)生閾值降低，皮膚發(fā)生致敏的機(jī)會(huì)增加，上述觀點(diǎn)已得到皮膚科領(lǐng)域的認(rèn)可。實(shí)際生活中，皮膚更易受到輕微損傷，但由于不會(huì)導(dǎo)致皮膚產(chǎn)生明顯炎癥，易被忽視。相對于屏障功能完整的皮膚，受到微損傷的皮膚接觸變應(yīng)原后ACD的發(fā)生率是否增加，將是本次研究的目的。

1材料和方法

1. 1對象具有芳香混合物Ⅰ(fragancemixⅠ，F(xiàn)MⅠ)過敏史的志愿者37名，最終完成試驗(yàn)33名，其中男6名，女27名，年齡30～59歲，平均(43.42±7.39)歲。所有志愿者無活動(dòng)性皮膚病，無全身系統(tǒng)性疾病，無光過敏史，1個(gè)月內(nèi)未使用抗組胺藥、抗炎藥或免疫抑制劑，未接受任何免疫治療，未同時(shí)參加其他臨床試驗(yàn);所有志愿者均了解研究過程并簽署知情同意書。

1. 2儀器Tewameter(TewameterTM210，Courage+Khazaka，Cologne，Germany)用于檢測TEWL;Corne-ometer(CorneometerCM820，Courage+Khazaka，Co-logne，Germany)用于檢測皮膚表皮含水量(CAP);Chromameter(CＲ-400，MinoltaCameraCo.Ltd.，Osa-ka，Japan)運(yùn)用L*a*b*顏色系統(tǒng)檢測皮膚顏色。儀器檢測前，志愿者用清水清洗雙前臂，在18℃～22℃、相對濕度40%～60%的環(huán)境中靜坐30min。

1. 3方法選取志愿者前臂屈側(cè)9個(gè)部位，每個(gè)部位為50px×50px大小，按照表1進(jìn)行隨機(jī)處理。

第一階段(刺激)第1～3天，2個(gè)部位進(jìn)行十二烷基磺酸鈉(SLS)敷貼，將1%SLS溶液30μL滴在50px×50px的濾紙上，置于皮膚表面，待濾紙干后取下;2個(gè)部位進(jìn)行膠帶粘貼(TS)，Tape(ScotchMagicTape，810ESp，19mm×25mm，MinnesotaMining＆Mfg，USA)，每個(gè)部位粘貼15次，每次粘貼時(shí)間、壓力和撕去膠帶的速度及方向均保持一致;2個(gè)部位使用上海希格瑪高技術(shù)有限公司生產(chǎn)的紫外線模擬儀SolarSimula-torSUV-1000進(jìn)行紫外線照射(UV)，照射劑量為0.8個(gè)最小紅斑量(MED);其余3個(gè)部位不做處理;每次

處理前進(jìn)行臨床評估和非創(chuàng)儀器檢測。

第二階段(致敏)第4～8天，第4天進(jìn)行臨床評估和非創(chuàng)儀器檢測后抽取外周靜脈血8mL，按照隨機(jī)表對不同部位進(jìn)行FMⅠ斑貼(PT)，斑試器采用芬蘭小室(Epitest，Tuusula，F(xiàn)inland);第6天(PT48h)，去除斑試器半小時(shí)后進(jìn)行臨床評估、非創(chuàng)儀器檢測和抽取外周靜脈血8mL;第8天進(jìn)行臨床評估和非創(chuàng)儀器檢測。

刺激階段臨床評分標(biāo)準(zhǔn)采用日本接觸性皮炎學(xué)會(huì)的刺激性接觸性皮炎評分標(biāo)準(zhǔn):0為沒有反應(yīng)，1為非常弱/輕微的紅斑，2為弱至中等紅斑，3為清晰的紅斑，4為紅斑、丘疹或有水腫，5為紅斑、水皰，6為腐蝕性反應(yīng)(大皰、壞死)。致敏階段采用國際接觸性皮炎研究小組的變態(tài)反應(yīng)斑貼試驗(yàn)評分標(biāo)準(zhǔn):0(－)為陰性反應(yīng);1(±)為可疑反應(yīng)，隱約可見的紅斑;2(+)為弱陽性反應(yīng)，紅斑，浸潤，可有丘疹;3(2+)為強(qiáng)陽性反應(yīng)，紅斑，浸潤，丘疹，水皰;4(3+)為極強(qiáng)陽性反應(yīng)，明顯紅斑和浸潤，融合性水皰;IＲ為刺激反應(yīng)，NT為未試驗(yàn)。

1.4實(shí)驗(yàn)室檢測抽取外周靜脈血，室溫凝固60min，離心1000r/min共15min，收集血清，應(yīng)用IL-1α和IL-12ELISA試劑盒進(jìn)行細(xì)胞因子測定。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS18(Systatversion18;Chicago，IL，USA)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料的兩兩比較采用配對t檢驗(yàn)及兩相關(guān)樣本的非參數(shù)檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水平P＜0.05。

2結(jié)果

2. 1刺激階段見表2。經(jīng)過連續(xù)3天弱刺激，33名志愿者所有部位臨床評分為0。非創(chuàng)儀器檢測結(jié)果顯示，SLS和TS部位TEWL值顯著高于基礎(chǔ)值，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(tSLS=－3.991，PSLS=0.001;tTS=－5.435，PTS=0.000);SLS部位CAP顯著低于基礎(chǔ)值，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.403，P=0.026);TS部位CAP值升高，但與基礎(chǔ)值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=－0.728，P=0.475);所有部位a*值與基礎(chǔ)值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。2.2致敏階段

2.2.1臨床評分見表3。去除FMⅠ斑貼后0.5h(第6天)及48h(第8天)，SLSPT，TSPT，UVPT及PT部位的臨床評分均顯著升高，與NONE及CONTＲOL部位差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t6SLSPT-NONE=－3.342，t6TSPT-NONE=－3.225，t6UVPT-NONE=－2.873，t6PT-NONE=－2.555，t6SLSPT-CON=－3.330，t6TSPT-CON=－3.221，t6UVPT-CON=－2.844，t6PT-CON=－2.539，t8SLSPT-NONE=－3.078，t8TSPT-NONE=－2.699，t8UVPT-NONE=－2.214，t8PT-NONE=－2.207，t8SLSPT-CON=－3.078，t8TSPT-CON=－2.699，t8UVPT-CON=－2.214，t8PT-CON=－2.207;P均＜0．05);SLSPT較PT部位、TSPT較PT部位臨床評分顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t6SLSPT-PT=－2.455，t6TSPT-PT=－2.266，t8SLSPT-PT=－2.580，t8TSPT-PT=－2.047;P均＜0.05);UVPT比PT部位臨床評分高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

2.2.2經(jīng)表皮失水率(TEWL)見圖1。第6天及第8天，SLSPT，TSPT，UVPT及PT部位的TEWL值均比NONE部位顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t6SLSPT-NONE=－8.341，t6TSPT-NONE=－9.294，t6UVPT-NONE=－7.283，t6PT-NONE=－3.943，t8SLSPT-NONE=－5.510，t8TSPT-NONE=－4.532，t8UVPT-NONE=－2.766，t8PT-NONE=－2.133;P均＜0．05);第6天CONTＲOL部位的TEWL值比NONE部位顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=－3.338，P=0.003);第6天TSPT較PT部位的TEWL值顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.404，P=0.026);第8天SLSPT和TSPT部位均比PT及CONTＲOL部位的TEWL值顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t8SLSPT-PT=3.684，t8TSPT-PT=2.849，t8SLSPT-CON=4.394，t8TSPT-CON=3.527;P均＜0．05);第6天和第8天UVPT與PT部位的TEWL值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

2.2.3皮膚表皮含水量(CAP)見圖2。第6天，SL-SPT，TSPT，UVPT及PT部位的CAP均比NONE部位顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t6SLSPT-NONE=－2.996，t6TSPT-NONE=－2.317，t6UVPT-NONE=－2.282，t6PT-NONE=－3.021;P均＜0．05);CONTＲOL較NONE部位升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=－1.912，P=0.07);第8天各部位間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

2.2.4皮膚顏色變化(a*值)見圖3。第6天及第8天，SLSPT，TSPT，UVPT及PT部位的a*值均比NONE部位顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t6SLSPT-NONE=－8.347，t6TSPT-NONE=－9.513，t6UVPT-NONE=－5.367，t6PT-NONE=－4.545，t8SLSPT-NONE

=－6.186，t8TSPT-NONE=－6.767，t8UVPT-NONE=－5.367，t8PT-NONE=－4.338;P均＜0．05);第6天SLSPT及TSPT較PT部位的a*值顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t6SLSPT-PT=－3.109，P6SLSPT-PT=0.005;t6TSPT-PT=－4.545，P6TSPT-PT=0.000)。

2.3實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果見表4。致敏后IL-1α和IL-12含量均較致敏前顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

3討論

本研究通過建立受到累積性微弱刺激而未出現(xiàn)臨床表現(xiàn)的皮膚模型，使其致敏產(chǎn)生ACD，根據(jù)臨床評分、非創(chuàng)儀器檢測結(jié)果和實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果來探討不同狀態(tài)皮膚屏障對接觸致敏的影響。研究選取三種刺激方式:SLS，TS和UV，分別代表化學(xué)、物理和紫外線這三類日常生活中常見的損傷。第一階段的刺激方式和濃度劑量，在連續(xù)3天累積損傷后，均不足以導(dǎo)致皮膚產(chǎn)生臨床癥狀。致敏階段選取FMⅠ為抗原，一方面由于FMⅠ是一種全球范圍內(nèi)常見且致敏率較高的抗原，選擇FMⅠ具有現(xiàn)實(shí)意義;另一方面FMⅠ不會(huì)導(dǎo)致皮膚產(chǎn)生強(qiáng)烈的ACD，也不易產(chǎn)生刺激性接觸性皮炎(ICD)，故既能保證研究過程中志愿者的安全，又能排除其他干擾因素，保證研究順利進(jìn)行。

在評判ACD嚴(yán)重程度的方法中，臨床評分是應(yīng)用廣泛、準(zhǔn)確性較高的方法，且經(jīng)驗(yàn)豐富的皮膚科醫(yī)生能鑒別大部分的ICD和ACD，準(zhǔn)確率達(dá)到70%。但由于視覺局限性和臨床癥狀相似，在臨床和科研工作中，常需借助更敏感、客觀的手段方法來幫助診斷和鑒別，本研究采用了各種非創(chuàng)儀器和實(shí)驗(yàn)室檢查。第一階段，經(jīng)過3天累積性刺激后，皮膚處于亞臨床狀態(tài)，臨床評分為0，非創(chuàng)儀器檢測結(jié)果顯示SLS和TS部位TEWL值顯著升高，SLS部位CAP值顯著降低，說明皮膚屏障功能受損，表皮含水量下降，但由于未產(chǎn)生臨床癥狀，臨床上不能進(jìn)行診斷。SLS作為典型的化學(xué)刺激物，具有強(qiáng)滲透性和刺激性，影響角質(zhì)層脂質(zhì)和蛋白質(zhì)合成進(jìn)而破壞皮膚屏障功能，同時(shí)造成表皮含水量下降。TS也是評價(jià)皮膚屏障的經(jīng)典方法，膠帶粘貼不僅減少角質(zhì)層的角質(zhì)細(xì)胞和細(xì)胞間脂質(zhì)，還使角質(zhì)層變薄，進(jìn)一步加劇對皮膚屏障的機(jī)械性損傷。經(jīng)過3天的TS，上層表皮被粘去，CM825檢測到的為較深層次的表皮細(xì)胞，這些細(xì)胞間連接更為緊密，含水量高于淺層表皮，故CAP值升高。

由于本研究志愿者均有FMⅠ致敏史，在第二階段致敏后，僅有一名志愿者所有部位的臨床評分均為0分，其余志愿者SLSPTS，TSPT，UVPT和PT部位的臨床評分均比致敏前顯著升高。第6天及第8天SLSPT和TSPT部位的臨床評分均高于PT部位，提示雖然刺激階段不能使皮膚產(chǎn)生明顯的臨床癥狀，但接觸致敏物后，已發(fā)生微弱損傷的部位致敏程度更強(qiáng)，且可與健康狀態(tài)下產(chǎn)生致敏的皮膚產(chǎn)生明顯差異。

在非創(chuàng)儀器的檢測中，TEWL的變化趨勢和臨床評估基本一致，經(jīng)過微損傷并致敏的部位TEWL值顯著高于未經(jīng)損傷的部位，說明SLS和TS刺激對皮膚屏障造成的影響增加了致敏的機(jī)會(huì)。CONTＲOL部位在去除斑貼后0.5hTEWL明顯升高，48h回到基礎(chǔ)值，提示濾紙斑貼會(huì)對皮膚造成短暫性封閉影響。第6天由于受到斑試器封閉作用和變態(tài)反應(yīng)造成的角質(zhì)細(xì)胞內(nèi)及細(xì)胞間水腫的影響，斑貼部位含水量較斑貼前顯著升高，第8天封閉作用消失，CAP快速下降，回到基線。由于TSPT部位角質(zhì)層厚度較薄，維持水分的固有成分減少，保持水分能力減弱，第8天時(shí)含水量下降最為明顯。

致敏后各斑貼部位a*值均升高，SLSPT和TSPT部位升高最明顯，與PT部位差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明第一階段的刺激增加了致敏后皮膚發(fā)生炎癥反應(yīng)的程度。CONTＲOL部位a*值無明顯變化，說明濾紙的封閉作用不會(huì)造成皮膚產(chǎn)生炎癥變化。本研究中可能由于UV在刺激階段造成的損傷較弱，故在致敏階段不能通過臨床評判和非創(chuàng)儀器的檢測分辨出差異。

IL-1α是反映炎癥反應(yīng)程度的細(xì)胞因子，值越高說明皮膚炎癥反應(yīng)程度越重;IL-12是反映變態(tài)反應(yīng)程度的細(xì)胞因子，值越高說明ACD反應(yīng)越強(qiáng)。致敏后IL-1α和IL-12均顯著升高，證明皮膚炎癥反應(yīng)程度增強(qiáng)，且產(chǎn)生了致敏反應(yīng)。

基于以上研究證明，受到微弱損傷的皮膚接觸變應(yīng)原后，ACD產(chǎn)生的幾率和程度較正常皮膚增加。為了及早發(fā)現(xiàn)皮膚屏障受到的微弱損傷，及時(shí)阻斷無臨床癥狀的皮膚向臨床疾病方向發(fā)展，預(yù)防接觸性皮炎的產(chǎn)生和發(fā)展，研究職業(yè)性皮膚病和環(huán)境性皮膚病的預(yù)防措施，筆者致力于早期發(fā)現(xiàn)屏障功能受到的微損傷，對皮膚屏障進(jìn)行敏感的檢測和正確的評判。

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